摘 要 目的: 研究绿原酸对移植性肿瘤的影响及与阿霉素联合用药后是否具有增敏作用。方法: 建立H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤模型, 考察绿原酸对移植瘤的抑制作用及与阿霉素联合用药后对阿霉素抗肿瘤作用是否有增敏作用。结果: 与模型组比较, 绿原酸对H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤有明显的抑制作用, 剂量20mg /kg 的抑制作用最强; 与阿霉素联合用药后对肿瘤的抑制作用有一定增强趋势, 但与单用阿霉素比较无显著性差异。结论: 绿原酸可显著对抗H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤的生长, 但与阿霉素联合用药对其肿瘤的抑制作用无增敏性。

关键词 绿原酸; 阿霉素; H 22肝癌; Lew is肺癌

绿原酸( CHA )是咖啡酸和奎宁酸酯, 是人类饮食中含量丰富的一种多酚类化合物, 存在于多种植物( 杜仲、金银花、咖啡) 、水果( 番茄、苹果、梨)、蔬菜(大蒜、马铃薯) 中, 具有多种生物学活性, 其抗肿瘤方面作用成为近年来研究热点, 但仅仅局限于从分子水平探讨其对肿瘤细胞的影响, 从整体水平考察其抗肿瘤药效学研究甚少。本课题主要争对从杜仲叶中提取纯化绿原酸开展抗肿瘤方面实验研究, 报告如下。

1 材料与方法

1. 1 试验药物 绿原酸( CHA), 类白色粉末, 含量, 99. 87%,批号, 061101, 由四川九章生物化工科技发展有限公司提供。阿霉素( ADM ): 红色粉针剂, 10m g /瓶, 批号: 0602E1, 由深圳万乐药业有限公司生产。

1. 2 细胞株 H 22肝癌、Lew is肺癌细胞株, 分别由四川大学实验动物中心细胞室、四川大学华西基础医学与法医学院药理室提供。悬浮/贴壁生长于RPM I-1640培养基中, 内含10%小牛血清, 100U /m l青霉素、100Lg /m l链霉素于37e 、5% CO2 的饱和湿度孵箱中培养, 每2~ 3天换液传代。

1. 3 动物 昆明种小鼠, SPF 级, a , 体重18. 0~ 22. 0g, 由四川省中医药科学院提供, 许可证号: scxk ( 川) 2005-19 号。C57BL /6小鼠, SPF级, a , 体重16. 0~ 19. 0g, 由四川大学实验动物中心提供, 许可证号: 第9号。

1. 4 方法

1. 4. 1 对H 22肝癌移植瘤的影响 建立H 22肝癌模型[ 1] : 收获处于对数生长期的H 22细胞接种于昆明种小鼠左前腋窝下0. 2m l/只, 待肿瘤长大时作为种鼠供实验用。无菌剥离种鼠肿瘤制成细胞悬液, 并按0. 2m l/只( 1 @ 106 个) 接种于小鼠左前腋窝下。按体重将小鼠随机分为6组, 每组9只, 分别为绿原酸高( 20m g /kg)、中( 10m g /kg)、低( 5m g /kg)剂量组, 联合用药组( 绿原酸20m g /kg, ADM 2m g /kg) , ADM 组2m g /kg 和模型组( NS)。于接种后的第二天开始静脉( iv) 给药, 每日一次, ADM 组连续给药5天, 其余各组连续给药9天。于接种后第6 天开始测量肿瘤体积( V= 0. 52 @ 移植瘤长径L @ 移植瘤最短径W2) 。待阴性组平均瘤重大于1. 0g (瘤体积约为0. 5 cm3 )时停止实验,脱颈椎处死小鼠并称重, 剥取肿瘤称重, 计算抑瘤率% = [ 1 -(给药组平均瘤重/阴性组平均瘤重) ] @ 100%; 联合用药合并Q 值, 同时解剖小鼠取出脾、胸腺称重, 计算脏器系数。

1. 4. 2 对Lew is 肺癌移植瘤的影响 建立Lewis 肺癌模型 , 按体重将C57 BL /6小鼠随机分为6组, 每组10只, 分别为绿原酸高( 40m g /kg)、中( 20mg / kg) 、低( 10m g /kg) 剂量组, 联合用药组(绿原酸20mg / kg、ADM2mg /kg ), ADM 组( 2mg /kg )和模型组( NS)。于接种后的第二天开始腹腔( ip)给药, 每日一次,ADM 组连续给药8天, 其余各组连续给药12天。于接种后第6天开始测量肿瘤体积, 待阴性组平均瘤重大于1. 0g (瘤体积约为0. 125px3 )时停止实验, 脱颈椎处死小鼠并称重, 剥取肿瘤称

重, 计算抑瘤率%, 合并用药Q 值, 同时解剖小鼠取出脾、胸腺称重, 计算脏器系数。

2 结果

2. 1 对H 22肝癌移植瘤生长体积、肿瘤的影响 绿原酸各剂量组、联合用药组、阿霉素组对H22肝癌的肿瘤具有明显抑制作用, 抑瘤率均大于40%, 联合用药组与阿霉素组比较对肿瘤有一定的降低作用, 但无统计学差异, 合并Q 值为0. 914, 表明绿原酸与阿霉素联合用药后对阿霉素抑制H 22肝癌的生长无增强作用。

2. 2 绿原酸对H 22肝癌昆明种小鼠脏器指数、体重的影响绿原酸各剂量组对H 22肝癌小鼠免疫脏器系数(胸腺、脾)无影响, 但绿原酸高中剂量组对小鼠体重有抑制作用。联合用药组、阿霉素对脏器系数、体重有明显抑制作用, 联合用药与单用阿霉素比较上述抑制作用有增强趋势。

2. 3 对Lew is肺癌移植瘤生长体积、肿瘤的影响 绿原酸各剂量组、联合用药组、阿霉素组对Lew is肺癌有明显抑制作用, 联合用药组与阿霉素组比较对瘤重有一定的降低作用, 但无统计学差异, 合并Q值为0. 950, 表明联合用药后对阿霉素抑制Lewis肺癌无增强作用。

2. 4 对Lew is肺癌移植瘤C57 BL /6小鼠脏器指数、体重的影响绿原酸对Lew is肺癌C57 BL /6小鼠免疫器官( 胸腺、脾脏) 脏器指数无明显影响; 联合用药组、阿霉素对Lew is肺癌C57 BL /6小鼠上述脏器指数有明显降低作用; 联合用药组的抑制作用更强于单用阿霉素组。

3 讨论

本研究表明, 绿原酸对H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤均有明显抑制作用, 但抑制作用未见剂量依赖性, 20mg /kg 表现出最强的抑制作用。绿原酸与阿霉素联合用药后合并Q值介于0. 85~ 1. 05 之间, 根据金氏公式得出联合用药对阿霉素抑制肿瘤的作用无增敏作用, 只是药效学简单的加和作用。绿原酸对胸腺、脾指数无任何影响, 而联合用药组和阿霉素有明显降低作用; 实验期间阿霉素和联合用药组动物出现体重减轻, 食欲降低, 毛发

无光泽脱落等现象, 而绿原酸和阴性组动物均无这些症状, 表明绿原酸抗肿瘤作用的同时并未表现出阿霉素对机体产生损伤的症状。文献报道, 肝微粒体中细胞色素P450家族中CYP2B1可催化肝微粒体中EFC ( 7-乙氧基- 4- 三氟甲基- 香豆素) 的代谢, 促进癌变; 绿原酸可抑制CYP2B1 活性, 从而抑制癌变的产生或发展; CYP2B1可降低ADM 的生物利用度, 使ADM 的代谢减缓。联合用药时绿原酸抑制机体内CYP2B1 活性, 使ADM 代谢减缓疗效毒性增加并伴随对脏器的抑制作用增强, 这与我们的研究结果是一致的。我们在考察绿原酸的抗肿瘤作用研究中, 其未表现出对机体免疫器官毒副作用, 有关其作用机理有待进一步研究。